دانلود کامل ترین جزوه انگل شناسی

جزوات رنگی و تایپ شده انگل شناسی

دانلود فایل

دکتر عدنانی پیام نور جزوه انگل شناسی

– ليوان يكبار مصرف معرف هاي لازم و طرز تهيه آنها:
– سرم فيزيولوژي: 5/8 – ( ٪ ): – ٪: ٪ – : :
-٪ – – – ()
– :
— ()

: حد معيني باشد و نيز همه ارگانيسم هايي كه در سطح مايع و در رسوب تجمع حاصل كرده اند، جدا گرديده و تشـخيص داده شـوند . بايـد نمونـه در مـدت 15 تـا 20دقيقـه بعـد از مرحلـهسانتريفوژ نهايي بررسي شود. در غير اين صورت ارگانيسم شكل طبيعي خود را از دست داده و يا تخريب مي گردد.
نمونه: بايد تازه باشـد و يـا در محلـول نگهدارنـده ماننـد فرمـالين 5يـا 10 درصـد بـافره و يـا SAF=sodiumAcetate‐Acetic Acid‐formalin نگهداري شوند.
براي نمونه هاي خيلي آبكي مرحله سانتريفوژ روش تلغيظ را مي توان حذف نمود.
مواد و وسايل مورد نياز :
فرمالين 5يا 10 درصد بافره ياSAF ،سرم فيزيولوژي 85/0 گـرم درصـد، محلـول سـولفات روي (محلـول آبـي 33/0) حدود 330گرم سولفات روي را با آب مقطر (با ميزان 670 ميلي ليتر)به حجم يك ليتر برسانيد.
وزن مخصوص محلول فوق بايد جهت نمونه هاي نگهداري شده در فرمالين به ميزان 20/1 و براي نمونـه هـاي تـازه18/1 باشد. در غير اين صورت بايد بوسيله اضافه نمودن سولفات روي و يا آب مقطر تنظيم گـردد و در بطـري هـاي در پيچ دار ذخيره گردد. تاريخ انقضاء را به مدت 36 ماه بعد از تازيخ ساخت برروي برچسب شيشه بنويسيد.

دانلود رایگان خلاصه کتاب جزوه انگل شناسی

روش كار:
1- حدود 4گرم مدفوع تازه را داخل 10ميلي ليتر فرمالين 10% (درون يك ظرف مناسب از نظر حجم نهايي) بريزيد.
مدفوع وفرمالين را كاملا”مخلوط كنيد. مخلوط را به مدت حداقل 30 دقيقه جهت ثابت شدن نگه داريد. اگر نمونه در محلول نگهدارنده فرمالين و يا SAF نگهداري شده است، مخلوط ماده نگهدارنده ومدفوع را به خوبي مخلوط كنيد.
2- نسبت به اندازه وقوام نمونه، تعدادكافي گاز جزوه انگل شناسی را روي هم قرار داده و آن را داخل يك قيف بگذاريـد . قيـفرا داخل يك لوله ته مخروطي بگذاريد و حدود 8 ميلي ليتر از مخلوط فوق را صاف نماييد تا رسوبي به اندازه 5/0 تـا1 ميلي ليتر بدست آيد، مگر اينكه نمونه مدفوع در ابتدا كم باشد.
3- محلول سرم فيزيولوژي 85/0% را تا سر لوله اضافه كنيـد و بـه مـدت 10دقيقـه در دور g 500 سـانتريفوژ نماييـد.
مقدار رسوب بدست آمده بايد حدود 5/0 تا 1 ميلي ليتر باشد. رسوب خيلي غليظ و يا خيلي رقيق نشان دهنـده روش نادرست تغليظ است.

(روش صحيح محاسبه تعداد دور در دقيقه بر اساس شعاع ،كه در سانتريفوژهاي مختلف، متفاوت است دركتب مرجـعموجود مي باشد.)
4- مايع رويي را دور ريخته و رسوب را در 1تا2 ميلي ليتر سولفات روي به حالت سوسپانسيون در آوريد وسـپس تـا
3-2 ميلي ليتر لبه لوله را با محلول سولفات روي پر كنيد.
5- به مدت يك دقيقه در دورg 500 سانتريفوژ كنيد. اجازه بدهيد كه بدون هيچ دخالتي سانتريفوژ كاملا”متوقف شود.
دو لايه تشكيل مي گردد. مقدار كمي رسوب در ته لوله و يك لايه سولفات روي در بالاي لوله مشاهده مي شود. كيست تك ياخته ها و بعضي از تخم كرم ها در سطح و بعضي از تخم هاي سنگين و يا دريچـه دار در رسـوب قرار ميگيرند .
8- بدون اينكه لوله را از سانتريفوژ خارج كنيد، يك يا دو قطره از سطح مايع را به كمك يك پي پت پاستور و يا يـكلوپ سيمي حرارت داده و سرد شده برداريد وروي يك لام بگذاريد. هرگز لوپ را به طور عمقـي وارد مـايع نكنيـد. بلكه فقط با سطح مايع آن را به طريقي تماس دهيد كه لوپ موازي با سطح مايع قرار گيرد (نه اينكـه بـا آن زاويـه 90 درجه بسازد.مطمئن باشيد كه نوك پي پت يا لوپ زير سطح مايع وارد نشود.) 7- يك لامل 22×22 ميلي متري روي آن قرار دهيد.
جهت آماده سازي نمونه از محلول لوگل هم مي توان استفاده نمود.

خلاصه کتاب پی دی اف جزوه انگل شناسی کامل دانلود رایگان

8- با عدسي با بزرگنمايي (10×) تمام سطح لامل را بررسي كنيد.
9- اگر مورد مشكوكي مشاهده جزوه انگل شناسی ، با بزرگنمايي (40×) براي مطالعه جزئيات بيشتر استفاده نمائيد. بايد حداقل 3/1 سطح لامل را حتي اگر مورد مشكوكي مشاهده نگرديد ، بررسي نمائيد.
10- قبل از آزمايش و يا بعد از آن مي توان لام مرطوب را جهت آمـوزش بـه ديگـران در يـك پليـت محتـوي كاغـذمرطوب در روي يك اپليكاتور و يا پايه مخصوص لام قرار دهيد. هواي محفظه بايد كاملا”مرطـوب باشـد امـا خـيسنباشد.
نكات قابل توجه در روش:
-استفاده از آب لوله كشي مي تواند جايگزين استفاده از سرم فيزيولوژي گردد. بعضي از كاركنان ترجيح ميدهند كه در تمام مراحل روش به جاي آب از محلول فرمالين 5% يا10% استفاده كنند.
– اگر نمونه ها در SAF نگهداري شده اند ،آزمايش از مرحله 2 شروع مي شود.
– اگر در مورد نمونه هاي تازه از آب لوله كشي استفاده شود، ممكن است انگل بلاستوسيستيس هومينيس از بين برود.
– اگر ترجيح مي دهيد كه جهت نمونه برداري لوله ها را از سانتريفوژ خـارج نمائيـد، دقـت كنيـد كـه قبـل از نمونـهبرداري سطح مايع تكان نخورد.
– بعضي از كاركنان ترجيح مي دهند كه مقدار كمي سولفات روي را به سطح لوله اضافه كرده ، به نحويكه سطح مـايعيك برآمدگي كوچك محدب شكل را تشكيل دهد و سپس لامل بر روي سطح آن قرار دهند. براي اينكار بايد 5 دقيقه صبر نموده و در اين مدت لوله را تكان ندهيد. سپس لامل را با دقت از روي لوله برداشته و جهت بررسـي روي يـكلام قرار مي گيرد.
محدوديتهاي روش:
تك ياخته هاي مشاهده شده در نمونه بايد بوسيله روش رنگ آميزي دائمـي تائيـد شـوند. بعضـي از تـك ياختـه هـاكوچك بوده و تشخيص آنها با اين روش مشكل مي باشد.
بايد حداكثر در فاصله زماني 5 دقيقه بعد از توقف كامل سانتريفوژ، سطح مايع جهت بررسي، برداشت گردد. چون هـرچه تماس ارگانيسمها با محلول سولفات روي بيشتر شود، امكان اينكه شكل طبيعي خود را از دست دهند، بيشـتر مـيباشد، بطوريكه اگر كيست پروتوزوئرها وتخم كرمهاي داراي ديواره ضخيم بيشتر از چند دقيقـه در تمـاس بـا محلـولسولفات روي با وزن مخصوص بالا قرار گيرد، ممكن است متلاشي شده و يا شكل طبيعي خود را از دست بدهد.
اگر از روش شناور سازي، به عنوان تنها روش تشخيصي استفاده ميكنيد،بايد سطح مايع و رسوب آن را بررسي كنيد تا مطمئن شويد همه ارگانيسمها را جـدا نمـوده وتشـخيص مـي دهيـد. بـه هـر حـال روش تغلـيظ فرمـالين – اتيـل استات(اتر)به عنوان بهترين جزوه انگل شناسی جهت جدا سازي و تشخيص تخم كرمها ،كيست،تك ياختـه هـا و غيـره مـي باشد.

رنگ آميزي تري كروم در انگل شناسي Trichrome staining
خلاصه: در بعضي مواقع خصوصا” در مورد نمونه هاي ديسانتري كه چندين ساعت از دفع آن گذشته باشد يا ساير آميب هايي كه در محيط هاي كشت اختصاصي رشد مي كنند، با موارد مشكوكي برخورد مي شود كه براي تشخيص قطعي جهت بررسي خصوصيات هسته، نحوه آرايشات كروماتيني جدار هسته، اندازه وموقعيت كاريوزوم، نياز به رنگ آميزي تري كروم دارد.
معرف هاي لازم و طرز تهيه آنها:
– رنگ تري كروم:
به 6/0 گرم كروموتروپ 2R ، 15/0 گرم لايت گرينSF ، 15/0 گرم فست گرين، 7/0 گرم اسيد فسفو تنگستيك مقدار يـك ميلـي ليتـر اسـيداستيك گلاسيال اضافه نموده و پس از 45-30 دقيقه حجم آنرا با آب مقطر به 100ميلي ليتر مي رسانيم.
– فيكساتيو بوآن: 30 حجم اسيد پيكريك اشباع + 10 حجم فرمالين تجارتي + 2 حجم اسيد استيك گلاسيال .
– اسيد الكل :100 ميلي ليتر الكل ˚96 + 100 ميكرو ليتر اسيد استيك گلاسيال .
ساير مواد و وسايل اختصاصي مورد نياز:
– الكل ˚70 – الكل ˚90 – الكل مطلق
-گزيلل – چسب كانادا بالزام – سرم اسب يا آلبومين
– لامل 20×40 – جار رنگ آميزي – روغن ايمرسيون روش انجام آزمايش :
1 – به مقداري از سوسپانسيون نمونه يك يا دو قطره سرم اسب (جهت ايجاد چسبندگي نمونه با سطح لام) افزوده و پس از يكنواخت كردن سوسپانسيون ،توسط يك لام، گسترش نازكي مشابه آنچه كه براي تهيه لام نازك خون انجام مي گيرد، تهيه و قبل از خشك شدن گسترش ،آنرا در فيكساتيو بوآن بمدت 15 دقيقه قرار ميدهيم. لازم به توضيح است كه درتمام مراحلي كه در زير آمده هيچگونه شستشويي وجود نداشته و گسترش در هيچيك از مراحل نبايد خشك شود.
2 – پس از اتمام زمان فيكساسيون ، گسترش را به الكل ˚70 جزوه انگل شناسی 2-1 دقيقه انتقال مي دهيم . گسترش را در اين حالت مي توان براي مدت نامحدود نگهداري و در فرصت ديگري مراحل رنگ آميزي را ادامه داد .

انگل شناسی

3 – گسترش را در رنگ تري كرومبمدت 15-10 دقيقهقرار مي دهيم.
4 – گسترش رادر اسيد الكلبمدت 5- 3 جزوه زیست شناسی جانوری رنگ زدايي قرار مي دهيم.
5 – گسترش را به الكل ˚ 96بمدت 5 -3 دقيقهانتقال مي دهيم (جهت آبگيري).
6- ادامه مرحله آبگيري با قرار دادن گسترش در الكل مطلقبمدت 5-3 دقيقه.
7- تكرار مرحله آبگيري با قرار دادن گسترش در جار الكل مطلقديگربمدت 5-3 دقيقه.
8- در آخرين مرحله گسترش را در گزيللبمدت 3-2 دقيق هقرار مي دهيم
9 – بمحض خارج كردن گسترش از گزيلل و قبل از خشك شدن گزيلل ، يك قطره چسب كانادا بالزامروي گسترش مي ريزيم و لامل را با دقت بطوريكه حباب هوا بين لام و لامل تشكيل نشود روي لام قرار مي دهيم .
پس از خشك شدن چسب،گسترش آماده براي بررسي ميكروسكوپي با عدسي 100 و روغن ايمرسيوناست .

كشت نمونه هاي مدفوع در بخش انگل شناسي
خلاصه:به منظور تبديل كيست ها به تروفوزوئيت و نيز به منظور نگهداري تروفوزوئيت ها و تكثير آنها كشت نمونه ها در محيط كشت سرم منعقده اسب (HSr+s) توصيه مي شود. اين محيط كشت دي فازيـك و گزنيـكمي باشد. كه در ادامه جزئيات ساخت و نحوه كار با آن توضيح داده مي شود.
– محيط كشت اصلاح شده سرم اسب، رينگر و نشاسته برنج (HSr+s)
اين محيط جزوه انگل شناسی ، يك محيط دي فازيك است كه شامل يك قسمت جامد و يك قسمت مايع مي باشد كه طبق قرارداد قسمت جامد آنرا با حروف بزرگ وقسمت مايع را با حروف كوچك نمايش مي دهند و محيطي بسيار مناسب براي تكثير و نگهداري انتامباهيستوليتيكا /انتامباديسپار مي باشد.
مواد و وسايل مورد نياز :
محيطHSr+s (Horse Serum,ringer+starch) مركب از حروف اول موادي است كه براي ساخت آن اسـتفادهشده است، مي باشد.
– سرم اسب – نشاسته برنج(ترجيحا”از شركتMerck) – اسيد كلريدريك(HCl)
– سود(NaOH) – آكريفلاوين – استرپتومايسين سولفات – آب مقطر
– رينگر: ( كلريد سديم (NaCl) ، كلرورپتاسيم(KCl) ، كلرور كلسيم (2(CaCl ، بيكربنات سديم(3(NaHCO )
– پي پت پاستور – پوآر – شعله گاز يا چراغ الكلي – اون c ˚80
– اتوكلاو – سمپلر هاي مختلف – سرسمپلر استريل – لوله محيط كشت درب پيچدار طرز ساخت :
1- قسمت جامد:ابتدا سرم اسب را در حرارتc ˚56 به مدت 30 دقيقه غير فعال مـي كنـيم ، سـپس مقـدار 5-2 ميلي ليتر از سرم غير فعال شده را در لوله هاي محيط كشت درب پيچدار كه قبلا”استريل كرده ايـم ريختـه ولوله را بطور مايل(Slant) بطوريكه ارتفاع 4 سانتي متري تشـكيل دهـد در دمـايc ˚80 قـرار مـي دهـيم تـا درهمين حالت سرم منعقد گردد.( زمان انعقاد بسته به فاصله لوله ها از المنت دسـتگاه فـرق كـرده و بـين 70-30 دقيقه متغير است ، بايد توجه نمودكه دماو زمان اضافي موجب پف كردن سرم و غيرقابل مصرف شدن محيط كشت مي شود.) قسمت جامد در دماي يخچال تا هنگام مصرف قابل نگهداريست.
2 – قسمت مايع:شامل محلو رينگر بوده كه متشكل از مواد زير مي باشد:
كلريد سديم (NaCl) 9 گرم، كلريدپتاسيم(KCl) 2/0 گرم، كلريـد كلسـيم (2(CaCl 2/0 گـرم، بيكربنـات سـديم(3(NaHCO 2/0 گرم و آب مقطرتا حجم1000 ميلي ليتر.
مواد فوق را در ارلن ريخته پس از حل شدن كامل pH آنرا روي 4/7- 2/7 تنظيم مي كنيم (در صـورت نيـاز بـهتنظيم pH ميتوان ازNaOH 40٪ استفاده نمود.) و قبل از استفاده با اتوكلاو آنرا استريل مي كنيم.
3 – نشاسته برنج: نشاسته برنج بصورت تجارتي موجود مي باشد تنها قبل از استفاده آنرا در لوله هاي درب پيچدار توسط اتوكلاو استريل مي كنيم ،ميزان مصرف آن براي هر ميلي ليتر فاز مايع مقدار3-2 گرم

ميباشد. (مصرف زيادي نشاسته باعث مرگ آميب مي گردد.)
4- استرپتومايسين سولفات :براي جلوگيري از رشد بيش از حد باكتري هـا از ايـن آنتـي بيوتيـك اسـتفاده مـيشود. اين آنتي بيوتيك بصورت ويال از داروخانه تهيه واز پودر خشك آن بميـزان 500-250 ميكروگـرم بـهازاي هر ميلي ليتر فاز مايع به محيط كشت اضافه مي شود.
روش انجام كشت:
1- ابتدا لوله فاز جامد و رينگر را از يخچال خارج مي جزوه انگل شناسی تا دمـاي آن بـه دمـاي اتـاق برسـد. و مشخصـاتنمونه را بر روي لوله فاز جامد ثبت مي كنيم.
2- در كنار شعله, فاز مايع (رينگر) را به لوله محيط “— /- ˚ -/:
() //() “